Plasmide CRISPR/Cas9 KO IP3KA (h): sc-404638
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- IP3KA Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique IP3KA, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: IP3KA Antibody (F-3): sc-271838
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO IP3KA (h) | sc-404638 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
ITPKA code l’inositol-trisphosphate 3-kinase A (IP3KA), une enzyme enrichie dans les neurones qui phosphoryle l’inositol 1,4,5-trisphosphate (IP3) afin de produire de l’IP4, remodelant ainsi la dynamique de la signalisation intracellulaire du Ca2+. En modulant la libération de calcium dépendante de l’IP3 à partir du réticulum endoplasmique, IP3KA influence l’activité synaptique, le remodelage des épines dendritiques et la transduction de signaux dépendante de l’activité. Cette voie recoupe le métabolisme des phosphoinositides ainsi que des réseaux de kinases régulés par le calcium, qui coordonnent l’organisation du cytosquelette et les réponses transcriptionnelles. Une dérégulation de la signalisation IP3KA/IP3 a été impliquée dans une altération de la plasticité neuronale et d’autres phénotypes de signalisation pertinents pour la neurobiologie et le remodelage de voies liées au cancer.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO IP3KA (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ITPKA dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ITPKA, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ITPKA à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine IP3KA.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ITPKA pour l'étude de la signalisation de IP3KA, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de ITPKA essentiels à la fonction de IP3KA
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ITPKA pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le IP3KA plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le IP3KA plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ITPKA. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le IP3KA plasmide HDR (h) et le IP3KA (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ITPKA pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ITPKA définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.