Integrin αIIb/ITGA2B/CD41 Plasmide Double Nickase (h): sc-400614-NIC

ITGA2B codifica l’integrina αIIb (CD41), un recettore di adesione arricchito in piastrine e megacariociti che forma un eterodimero con l’integrina β3 (αIIbβ3) per legare il fibrinogeno e altri ligandi contenenti il motivo RGD. Questa integrina è un mediatore centrale dell’aggregazione piastrinica, del rimodellamento del citoscheletro e della segnalazione bidirezionale outside-in/inside-out che coordina adesione, spreading e secrezione dei granuli. La segnalazione di αIIbβ3 interagisce con vie dipendenti da Src/FAK, con la segnalazione PI3K–AKT e con reti di regolazione dell’actina per controllare la formazione del tappo emostatico e la stabilità del trombo. La variabilità genetica o un’espressione alterata di ITGA2B è associata a disturbi ereditari della funzione piastrinica ed è ampiamente studiata nel contesto di trombosi disregolata e fenotipi emorragici.

Integrin αIIb/ITGA2B/CD41 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ITGA2B nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ITGA2B. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ITGA2B. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ITGA2B interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.