Integrin β8/ITGB8 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-435838-ACT

Itgb8はインテグリンβ8をコードしており、これはαvと対を成してαvβ8受容体を形成するβサブユニットです。αvβ8受容体は細胞表面の接着分子で、細胞外マトリックス（ECM）リガンドを細胞骨格およびシグナル伝達ネットワークへと連結します。マウス組織においてITGB8は、細胞移動、組織リモデリング、上皮‐間葉間コミュニケーションに寄与し、ECM関連複合体との相互作用を介した潜在型TGF-βの活性化における主要な制御因子です。フォーカルアドヒージョン（焦点接着）シグナルやTGF-β/SMAD経路とのクロストークを通じて、ITGB8は分化プログラム、バリア機能、免疫細胞の挙動に影響を与えます。ITGB8活性の制御破綻は、前臨床およびトランスレーショナル研究において、線維性リモデリング、炎症性微小環境、腫瘍生物学と関連づけられており、経路解析のための機構的な結節点としての有用性が示唆されています。

Integrin β8/ITGB8 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Itgb8の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Integrin β8/ITGB8 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Itgb8 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はItgb8転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Integrin β8/ITGB8の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のItgb8遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるIntegrin β8/ITGB8依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびItgb8発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるIntegrin β8/ITGB8経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。