Integrin α6/ITGA6/CD49f Plasmide Double Nickase (h): sc-400380-NIC

ITGA6 codifica l’integrina α6 (CD49f), una subunità α che si associa principalmente con β1 o β4 per formare recettori leganti la laminina che mediano l’adesione tra cellula e matrice extracellulare. I complessi dell’integrina α6 coordinano i segnali associati alle adesioni focali e agli emidesmosomi per regolare polarità epiteliale, migrazione e sopravvivenza attraverso vie che includono FAK/SRC, PI3K–AKT e MAPK. CD49f è ampiamente utilizzata come marcatore associato a progenitori epiteliali e a compartimenti con caratteristiche staminali, riflettendo il suo ruolo nel mantenimento dell’architettura tissutale e delle interazioni con la nicchia. Un’espressione disregolata di ITGA6 o un’alterazione della segnalazione integrinica è collegata a invasione, disseminazione metastatica e fenotipi di resistenza alle terapie in molteplici contesti tumorali, oltre che alla biologia della membrana basale e delle bolle cutanee tramite strutture di ancoraggio dipendenti da α6β4.

Integrin α6/ITGA6/CD49f Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ITGA6 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ITGA6. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ITGA6. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ITGA6 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.