Plásmido Doble Nickase (h) Integrin α6/ITGA6/CD49f: sc-400380-NIC

ITGA6 codifica la integrina α6 (CD49f), una subunidad α que se asocia principalmente con β1 o β4 para formar receptores de unión a laminina que median la adhesión célula–matriz extracelular. Los complejos de integrina α6 coordinan la adhesión focal y la señalización asociada a hemidesmosomas para regular la polaridad epitelial, la migración y la supervivencia mediante vías que incluyen FAK/SRC, PI3K–AKT y MAPK. CD49f se utiliza ampliamente como marcador asociado a progenitores epiteliales y compartimentos con características de células madre, lo que refleja su papel en el mantenimiento de la arquitectura tisular y las interacciones con el nicho. La expresión desregulada de ITGA6 o la señalización alterada de integrinas se vincula con la invasión, la diseminación metastásica y fenotipos de resistencia a terapias en múltiples contextos tumorales, así como con la biología de la membrana basal y el ampollamiento cutáneo a través de estructuras de anclaje dependientes de α6β4.

Integrin α6/ITGA6/CD49f El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ITGA6 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ITGA6. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ITGA6. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ITGA6 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.