Integrin β3/ITGB3/CD61 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-421175-ACT

Itgb3 codifica l’integrina β3 (ITGB3/CD61), una subunità β che si associa con αIIb o αV per formare recettori integrinici che mediano l’adesione cellula–cellula e cellula–matrice. Attraverso il legame con i ligandi e la segnalazione bidirezionale, l’integrina β3 regola l’assemblaggio delle adesioni focali, il rimodellamento del citoscheletro di actina, la migrazione e vie di sopravvivenza che includono la segnalazione FAK/Src, PI3K–AKT e MAPK. Nei sistemi murini, Itgb3 è ampiamente studiato nella biologia di piastrine e megacariociti, nell’angiogenesi, nella funzione degli osteoclasti e nel traffico delle cellule infiammatorie, collegando la sua disregolazione a fenotipi legati alla trombosi, al rimodellamento vascolare e alle interazioni tumore–stroma. Questi ruoli rendono ITGB3 un nodo utile per indagare la segnalazione dipendente dall’adesione e la meccanotrasduzione in modelli rilevanti per lo sviluppo e la malattia.

Integrin β3/ITGB3/CD61 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Itgb3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Integrin β3/ITGB3/CD61 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Itgb3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Itgb3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Integrin β3/ITGB3/CD61. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Itgb3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Integrin β3/ITGB3/CD61 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Integrin β3/ITGB3/CD61 nelle cellule tumorali con espressione di Itgb3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.