Integrin α2/ITGA2/CD49b CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400913-ACT

ITGA2 kodiert Integrin α2 (CD49b), einen Adhäsionsrezeptor, der mit Integrin β1 zum α2β1‑Komplex dimerisiert, einem wichtigen Kollagen- und Lamininrezeptor in vielen epithelialen, endothelialen und Immunzelltypen. Indem α2β1 die Bindung an die extrazelluläre Matrix mit intrazellulärer Signalübertragung koppelt, reguliert es die Bildung fokaler Adhäsionen, den Umbau des Zytoskeletts und die Mechanotransduktion über Signalwege, zu denen u. a. FAK/SRC, PI3K–AKT und MAPK gehören. Die ITGA2‑Aktivität beeinflusst Zellmigration, Thrombozytenadhäsion und Gewebeumbau; eine veränderte Expression oder Funktion wurde mit Fibrose, Entzündungsreaktionen sowie Tumorzellinvasion und Metastasierung in Verbindung gebracht. Als Oberflächenrezeptor mit kontextabhängigen Signalausgängen wird ITGA2 häufig in der Biologie der extrazellulären Matrix, beim Integrin‑Crosstalk und in Modellen der Zell‑Matrix‑Interaktion untersucht.

Integrin α2/ITGA2/CD49b Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ITGA2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Integrin α2/ITGA2/CD49b Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ITGA2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ITGA2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Integrin α2/ITGA2/CD49b-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ITGA2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Integrin α2/ITGA2/CD49b-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Integrin α2/ITGA2/CD49b-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ITGA2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.