INSR/Insulin Receptor CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400075-ACT

INSRはインスリン受容体をコードしており、インスリンと結合して自己リン酸化を開始し、PI3K–AKT経路およびRAS–MAPK経路を介した下流シグナル伝達を誘導する膜貫通型の受容体チロシンキナーゼである。これらのカスケードは、グルコース取り込み、グリコーゲン合成、脂質代謝に加え、細胞の増殖・生存制御をより広範に協調させ、mTORやFOXOにより制御される転写プログラムとのクロストークも伴う。INSR活性は、受容体のエンドサイトーシスおよびリサイクリングの動態を規定し、IRSファミリーなどのアダプタータンパク質のレベルでインスリン感受性にも影響を及ぼす。INSRシグナルの破綻（ディスレギュレーション）は、インスリン抵抗性や代謝疾患の病態と強く関連し、また複数の組織や腫瘍微小環境で観察される増殖シグナルの変調にも関与する。

INSR/Insulin Receptor CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性INSRの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

INSR/Insulin Receptor CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における INSR 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はINSR転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性INSR/Insulin Receptorの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のINSR遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるINSR/Insulin Receptor依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびINSR発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるINSR/Insulin Receptor経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。