Plásmido CRISPR de Activación (m) Ini1: sc-423027-ACT

Smarcb1 de ratón codifica Ini1 (también conocida como SNF5/BAF47), una subunidad central del complejo SWI/SNF (BAF) de remodelación de la cromatina dependiente de ATP, que regula el posicionamiento de los nucleosomas y programas transcripcionales que controlan la progresión del ciclo celular, la especificación de linaje y la diferenciación. Ini1 ayuda a coordinar la accesibilidad de potenciadores y promotores, integrando señales con el estado de la cromatina para modular redes de expresión génica implicadas en el desarrollo y en las respuestas al daño del ADN. La alteración de la función de SMARCB1/INI1 se asocia con una regulación epigenética modificada y una proliferación aberrante, y la pérdida de subunidades de SWI/SNF es una característica recurrente en múltiples tipos tumorales. Como regulador central de la cromatina, Smarcb1 se estudia con frecuencia en vías que gobiernan el equilibrio entre represión y activación transcripcional, el control de puntos de control y la arquitectura de la cromatina.

Ini1 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Smarcb1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Ini1 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Smarcb1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Smarcb1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Ini1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Smarcb1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Ini1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Ini1 en células tumorales con expresión de Smarcb1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.