Plásmido CRISPR de Activación (h) Inhibin β-A: sc-402676-ACT

INHBA codifica la subunidad beta A de la inhibina humana, que puede homodimerizar para formar activina A o heterodimerizar con la subunidad alfa de la inhibina para formar inhibina A, moduladores clave de la endocrinología reproductiva y la homeostasis tisular. La señalización de activina/inhibina activa vías de la superfamilia TGF-β, en particular programas transcripcionales mediados por SMAD2/3 que regulan la proliferación y diferenciación celular, la remodelación de la matriz extracelular y las respuestas inflamatorias. La actividad de INHBA se ha implicado en procesos del desarrollo y en la reparación de heridas, y se han descrito alteraciones de su expresión en múltiples contextos patológicos, incluida la fibrosis y la remodelación del microambiente asociado a tumores. Como componente ligando secretado, la inhibina beta A también actúa como un nodo que vincula la señalización paracrina con cambios posteriores en la expresión génica en diversos tipos celulares.

Inhibin β-A El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de INHBA sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Inhibin β-A El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus INHBA en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional INHBA, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Inhibin β-A. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo INHBA y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Inhibin β-A en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Inhibin β-A en células tumorales con expresión de INHBA silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.