Inhibin α Double Nickaseプラスミド (h): sc-402958-NIC

INHAはインヒビンαサブユニットをコードしており、インヒビンβ鎖と二量体を形成してインヒビンAまたはインヒビンBとなります。これらはTGF-βスーパーファミリーに属する分泌性糖タンパク質で、アクチビンのシグナル伝達に拮抗します。インヒビンはSMAD2/3依存的な転写を調節することで、ゴナドトロピン（FSH）のフィードバック、生殖軸の機能、さらに性腺および内分泌組織における細胞増殖・分化などの幅広い過程を制御します。INHAの発現およびインヒビン／アクチビンのバランスは、卵巣生理、顆粒膜細胞機能、性索間質性腫瘍の生物学に関与するとされ、生殖・内分泌研究ではバイオマーカーとしてしばしば評価されます。この経路の破綻や調節異常は、ステロイド産生に関連する遺伝子プログラムや、性腺微小環境における細胞外シグナルの手掛かりを変化させる可能性があります。

Inhibin α ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における INHA 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、INHA内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、INHAの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、INHAが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。