IL-6Rα CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400582-ACT

IL6R kodiert die menschliche Alpha-Untereinheit des Interleukin‑6‑Rezeptors (IL‑6Rα), eine ligandenbindende Komponente, die die zelluläre Responsivität auf IL‑6 vermittelt und die Signalübertragung über den gp130‑Korezeptorkomplex koordiniert. Die Bindung an IL‑6Rα fördert nachgeschaltet die Aktivierung der Signalwege JAK/STAT3, MAPK/ERK und PI3K/AKT und prägt dadurch Akut‑Phase‑Antworten, die Differenzierung von Leukozyten und die Gewebehomöostase. IL‑6Rα ist zudem an klassischem und Trans‑Signaling beteiligt, die die Dynamik von Zytokinnetzwerken und inflammatorische Sollwerte in Immun‑ und Stromakompartimenten beeinflussen. Eine fehlregulierte IL6R‑Expression oder Signalübertragung wird mit chronischen Entzündungen und Autoimmunität in Verbindung gebracht und ist Gegenstand umfangreicher Forschung in der Onkologie und kardiovaskulären Biologie, wo sie als Treiber für Mikroumgebungs‑Remodeling und systemische inflammatorische Phänotypen gilt.

IL-6Rα Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen IL6R-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

IL-6Rα Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des IL6R-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der IL6R-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen IL-6Rα-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native IL6R-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von IL-6Rα-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des IL-6Rα-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem IL6R-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.