Plásmido CRISPR de Activación (h) IL-3Rα: sc-437304-ACT

IL3RA codifica la cadena alfa del receptor de interleucina-3 (IL-3Rα/CD123), una subunidad del receptor de citocinas que confiere especificidad de unión al ligando y se asocia con la cadena beta común para iniciar la señalización dependiente de IL-3. La activación de IL-3Rα promueve la activación aguas abajo de las vías JAK/STAT, PI3K/AKT y MAPK/ERK, apoyando la supervivencia y proliferación de células hematopoyéticas, así como la diferenciación hacia el linaje mieloide. La expresión de IL3RA está enriquecida en progenitores hematopoyéticos y en ciertos subgrupos inmunitarios, lo que la convierte en un marcador útil para estudiar programas inducidos por citocinas y la dinámica del tráfico del receptor. La desregulación de la señalización de IL3RA y los cambios en la abundancia del receptor se han asociado con mielopoyesis aberrante y fenotipos inmunitarios inflamatorios, lo que impulsa su investigación mecanística en modelos celulares relevantes para enfermedad.

IL-3Rα El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de IL3RA sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

IL-3Rα El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus IL3RA en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional IL3RA, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de IL-3Rα. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo IL3RA y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de IL-3Rα en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía IL-3Rα en células tumorales con expresión de IL3RA silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.