Plasmide CRISPR/Cas9 KO IL-18Rβ (m): sc-421095

Présentation

Il18rap code la protéine accessoire du récepteur de l’IL-18 (IL-18Rβ), un co‑récepteur essentiel qui hétérodimérise avec IL‑18Rα pour former un complexe récepteur de l’IL‑18 fonctionnel à la surface des cellules immunitaires. Lors de la liaison de l’IL‑18, IL‑18Rβ contribue au recrutement de MyD88 et à l’activation en aval de la signalisation IRAK/TRAF6, favorisant l’activation des voies NF‑κB et MAPK et l’induction de cytokines inflammatoires telles que l’IFN‑γ. Cet axe influence la polarisation Th1, la fonction effectrice des cellules NK et l’activation myéloïde, reliant Il18rap à la régulation des réponses immunitaires innées et adaptatives. Des altérations de la signalisation IL‑18/IL‑18R ont été impliquées dans des processus inflammatoires et auto‑immuns et sont fréquemment étudiées dans des contextes d’infection, d’inflammation stérile et de modèles d’immunologie tumorale chez la souris.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO IL-18Rβ (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Il18rap dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Il18rap, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Il18rap à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine IL-18Rβ.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Il18rap pour l'étude de la signalisation de IL-18Rβ, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Il18rap essentiels à la fonction de IL-18Rβ
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Il18rap pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le IL-18Rβ plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le IL-18Rβ plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Il18rap. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le IL-18Rβ plasmide HDR (m) et le IL-18Rβ (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Il18rap pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Il18rap définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.