IL-15 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-421089-ACT

Das murine Gen **Il15** kodiert Interleukin-15 (IL-15), ein pleiotropes Zytokin, das die Entwicklung, das Überleben und die Aktivierung von NK-Zellen sowie CD8+-T-Zellen mit Gedächtnisphänotyp unterstützt. IL-15 signalisiert über die IL-2/15-Rezeptor-β-Kette und die gemeinsame γ-Kette, wobei eine durch IL-15Rα vermittelte Transpräsentation erfolgt, und aktiviert dabei die JAK1/3–STAT5-, PI3K–AKT- und MAPK-Signalwege, um Proliferation und zytotoxische Programme zu regulieren. Über diese Netzwerke prägt IL-15 die antivirale und antitumorale Immunüberwachung und trägt zu Entzündungskreisläufen bei, die die Gewebehomöostase beeinflussen. Eine fehlregulierte IL-15-Expression wurde mit immunvermittelter Pathologie und veränderter Lymphozytendynamik in Verbindung gebracht, was **Il15** zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung zytokingetriebener Immunität macht.

IL-15 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Il15-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

IL-15 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Il15-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Il15-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen IL-15-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Il15-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von IL-15-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des IL-15-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Il15-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.