IGFBP4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-421065

Übersicht

Igfbp4 kodiert das insulinähnliche Wachstumsfaktor-Bindungsprotein 4 (IGFBP4), einen sezernierten Regulator der IGF-Bioverfügbarkeit, der die Interaktionen von IGF1/IGF2 mit IGF-Rezeptoren moduliert und dadurch nachgeschaltete PI3K–AKT- und MAPK-Signalwege beeinflusst. In Mausgeweben trägt IGFBP4 durch die Kontrolle der lokalen IGF-Aktivität dazu bei, Zellproliferation, Überleben, Differenzierung sowie die Signalübertragung im extrazellulären Mikromilieu zu prägen. Eine veränderte IGFBP4-Expression wurde mit Umbau- und Entzündungsprogrammen in vaskulären und stromalen Kompartimenten sowie mit Veränderungen wachstumsfaktorgetriebener Phänotypen in Verbindung gebracht, die für die metabolische Regulation und tumorassoziierte Mikroumgebungen relevant sind. Als kontextabhängiger Modulator mitogener Signalübertragung wird Igfbp4 häufig in Studien zur Entwicklung, Gewebehomöostase und zu Krankheitsmechanismen untersucht, bei denen eine dysregulierte Wachstumsfaktor-Signalgebung eine Rolle spielt.

Das IGFBP4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Igfbp4-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Igfbp4-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Igfbp4 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die IGFBP4-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Igfbp4-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der IGFBP4-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Igfbp4-Exone abzielen, die für die IGFBP4-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Igfbp4-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom IGFBP4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom IGFBP4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Igfbp4-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das IGFBP4 HDR-Plasmid (m) und IGFBP4 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Igfbp4-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Igfbp4-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.