IGF2BP3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-431213-ACT

Igf2bp3 codifica a IGF2BP3, uma proteína oncofetal de ligação a RNA que reconhece transcritos modificados por m6A e modula a estabilidade, a localização e a tradução do mRNA. A IGF2BP3 influencia programas de regulação gênica pós-transcricional que sustentam proliferação, sobrevivência e migração, interagindo com vias de sinalização por fatores de crescimento e de controle do ciclo celular. Em sistemas murinos, a atividade de Igf2bp3 é comumente estudada em contextos de desenvolvimento e em modelos de crescimento aberrante, nos quais se observa a reativação de redes fetais de regulação de RNA. Regulons de RNA associados à IGF2BP3 e desregulados têm sido ligados a alterações em transições de estado celular e a fenótipos invasivos em diversos cenários de pesquisa relevantes para doenças.

IGF2BP3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Igf2bp3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IGF2BP3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Igf2bp3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Igf2bp3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IGF2BP3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Igf2bp3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IGF2BP3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IGF2BP3 em células tumorais com expressão de Igf2bp3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.