Plasmide CRISPR d'Activation (h) IGF2BP2: sc-404985-ACT

IGF2BP2 (protéine 2 de liaison à l’ARNm d’IGF2) est une protéine cytoplasmique liant l’ARN qui reconnaît les transcrits modifiés par m6A et régule, de manière dépendante du contexte, la localisation, la stabilité et la traduction des ARNm. En façonnant des programmes d’expression génique post-transcriptionnels, IGF2BP2 influence le métabolisme cellulaire, la prolifération et les réponses adaptatives au stress, et a été associée au remodelage de réseaux de signalisation tels que PI3K–AKT et MAPK via le contrôle d’ARNm liés à ces voies. Une activité altérée d’IGF2BP2 a été associée à des variations de traits métaboliques et à des sorties transcriptionnelles liées à la croissance dérégulées observées dans plusieurs modèles pertinents pour les maladies, notamment des phénotypes liés au cancer et au diabète. Ces propriétés font d’IGF2BP2 un nœud utile pour étudier les décisions de destinée des ARN et leurs effets en aval sur la régulation de l’état cellulaire.

IGF2BP2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de IGF2BP2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

IGF2BP2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus IGF2BP2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription IGF2BP2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de IGF2BP2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus IGF2BP2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de IGF2BP2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie IGF2BP2 dans les cellules tumorales présentant une expression de IGF2BP2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.