Plásmido Doble Nickase (h) IFITM2: sc-403889-NIC

IFITM2 (proteína transmembrana inducida por interferón 2) es una proteína transmembrana de tipo II inducida por la señalización de interferones de tipo I y tipo II, y actúa como un factor de restricción intrínseco que limita la entrada y las etapas tempranas de replicación de diversos virus envueltos. Se localiza principalmente en compartimentos endosomales y de la membrana plasmática, donde altera las propiedades y el tráfico de membrana para dificultar la fusión y la captación viral, vinculándose así con la defensa inmunitaria innata y las redes de genes estimulados por interferón. La actividad de IFITM2 se cruza con vías que regulan la endocitosis, la organización de vesículas y la señalización inflamatoria, y su expresión se utiliza con frecuencia como indicador de la activación de la vía del interferón. La expresión desregulada de IFITM2 se ha estudiado en el contexto de una activación inmunitaria anómala y de estados inflamatorios asociados a infecciones, lo que respalda su relevancia para estudios mecanísticos de las interacciones huésped–patógeno.

IFITM2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus IFITM2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de IFITM2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de IFITM2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con IFITM2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.