Plasmide Double Nickase (h) IFIT2: sc-403830-NIC

La protéine induite par l’interféron contenant des répétitions tétratricopeptidiques 2 (IFIT2) est un gène stimulé par l’interféron qui code un effecteur antiviral cytosolique se liant à des espèces d’ARN et modulant la traduction ainsi que le métabolisme de l’ARN au cours des réponses immunitaires innées. IFIT2 est induit en aval de la signalisation des interférons de type I via la voie JAK–STAT et une transcription pilotée par ISGF3, et s’intègre à des programmes antiviraux plus larges aux côtés d’autres membres de la famille IFIT. Par ses interactions avec les ARN viraux et cellulaires et par la régulation des voies du stress et de l’apoptose, IFIT2 contribue à limiter la réplication virale et à façonner les réponses inflammatoires. Une expression dérégulée d’IFIT2 a été associée à des signatures d’interféron altérées observées lors d’infections, en biologie du cancer et dans des troubles immuno-médiés, ce qui en fait un nœud utile pour disséquer la régulation des voies de l’interféron.

IFIT2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus IFIT2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de IFIT2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de IFIT2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de IFIT2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.