Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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IDE Double Nickase Plasmid (h): sc-401900-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das IDE Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- IDE Double-Nickase-Plasmid (h) und IDE Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf IDE abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: IDE: sc-393887
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
IDE Double Nickase Plasmid (h) | sc-401900-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
IDE Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401900-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Die humane IDE (insulinabbauendes Enzym) ist eine zinkabhängige Metalloprotease, die Insulin und andere bioaktive Peptide spaltet und damit zum Umsatz von Peptidhormonen sowie zur Proteostase im Zytosol, in Endosomen und in peroxisomalen Kompartimenten beiträgt. Die IDE-Aktivität beeinflusst die Dynamik der Insulinsignalgebung und greift in Signalwege ein, die die Glukosehomöostase und zelluläre Stressantworten steuern. Eine veränderte IDE-Expression oder -Funktion wurde mit einer gestörten Insulinclearance in Verbindung gebracht und im Kontext der Biologie metabolischer Erkrankungen sowie von Peptidaggregationsprozessen untersucht, die für neurodegenerative Mechanismen relevant sind. Diese Eigenschaften machen IDE zu einem nützlichen Ziel, um zu untersuchen, wie proteolytische Regulation endokrine Signalgebung, Peptidkatabolismus und zelluläre Homöostase prägt.
IDE Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des IDE-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von IDE abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die IDE-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit IDE-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.