Plasmide Double Nickase (h) HXK I: sc-401753-NIC

Le gène humain **HK1** code l’hexokinase I (**HXK I**), une enzyme associée à la membrane externe de la mitochondrie qui catalyse la phosphorylation du glucose en glucose-6-phosphate, réaction dépendante de l’ATP, engageant ainsi le glucose dans la glycolyse et favorisant son entrée dans la voie des pentoses phosphates. En couplant l’utilisation du glucose aux besoins énergétiques cellulaires et à l’homéostasie redox, HXK I influence les flux métaboliques, la production de NADPH et la disponibilité de précurseurs biosynthétiques qui façonnent la prolifération et les réponses au stress. HK1 participe également à la physiologie mitochondriale via des interactions pouvant moduler la signalisation apoptotique et les voies de survie cellulaire. Des altérations de l’expression ou de la régulation de HK1 ont été associées à la reprogrammation métabolique observée dans divers contextes pathologiques, notamment la neurodégénérescence, les lésions ischémiques et les phénotypes glycolytiques liés au cancer, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques du métabolisme du glucose.

HXK I Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus HK1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de HK1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de HK1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de HK1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.