Plasmide Double Nickase (h) H+/K+ ATPase β: sc-403057-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) H+/K+ ATPase β correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide H+/K+ ATPase β Double Nickase (h) et le plasmide H+/K+ ATPase β Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ATP4B. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: H+/K+ ATPase β Antibody (C-4): sc-374094
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) H+/K+ ATPase β | sc-403057-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) H+/K+ ATPase β | sc-403057-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ATP4B code la sous-unité β de l’ATPase gastrique H+/K+, une ATPase de type P hétérodimérique qui assure la sécrétion de protons en échange de potassium à travers la membrane apicale des cellules pariétales. La sous-unité β soutient la stabilité catalytique et le trafic membranaire de la sous-unité α, permettant une acidification durable nécessaire à la physiologie digestive et à l’homéostasie épithéliale. Ce complexe participe à des voies de transport ionique et de régulation du pH qui influencent la fonction de barrière muqueuse et la signalisation dans l’épithélium gastrique. Une expression altérée d’ATP4B et une perturbation des programmes de sécrétion acide gastrique ont été associées à des pathologies de la muqueuse gastrique et sont fréquemment étudiées dans le contexte du remodelage lié à l’inflammation et de la biologie du cancer gastrique.
H+/K+ ATPase β Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ATP4B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ATP4B. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ATP4B. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ATP4B.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.