HSPC144 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-412026

Übersicht

THYN1 (auch bekannt als HSPC144) kodiert ein nukleäres Thymozytenprotein, das an der Regulation der Apoptose und der Kontrolle des Zellzyklus beteiligt ist; es wurden zudem Funktionen bei der Aufrechterhaltung der zellulären Homöostase während Proliferation und Stress beschrieben. Das Protein wird mit nukleären Prozessen in Verbindung gebracht, die Überlebenssignale beeinflussen, und könnte mit Signalwegen der programmierten Zell­ab­tö­tung interagieren, einschließlich caspaseabhängiger Mechanismen. Eine veränderte THYN1-Expression wurde in mehreren Tumorkontexten beobachtet, was auf eine Relevanz für onkogene Transformation und die Fitness von Tumorzellen hindeutet. Daher wird THYN1 häufig in Modellen der hämatopoetischen sowie der soliden Gewebebiologie untersucht, um zu klären, wie die Regulation der Apoptose zu krankheitsassoziierten Phänotypen beiträgt.

Das HSPC144 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des THYN1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des THYN1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von THYN1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die HSPC144-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von THYN1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der HSPC144-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf THYN1-Exone abzielen, die für die HSPC144-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere THYN1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom HSPC144 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom HSPC144 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des THYN1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das HSPC144 HDR-Plasmid (h) und HSPC144 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von THYN1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten THYN1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.