HSPA8/HSC70 Double Nickaseプラスミド (h): sc-418508-NIC

HSPA8は、恒常的に発現するシャペロンHSC70をコードしており、HSP70ファミリーの中核的構成要素として、新生ポリペプチドやストレスにより変性したポリペプチドに結合し、フォールディング／リフォールディングの促進および凝集の防止に寄与します。HSC70は、DNAJ群やヌクレオチド交換因子（NEF）などの共シャペロンとともにATP依存的なシャペロン・サイクルに関与し、細胞質および各種オルガネラにわたるプロテオスタシス（タンパク質恒常性）を支えています。また、シャペロン介在性オートファジーの主要な制御因子であるほか、エンドサイトーシスにおけるクラスリンの脱被覆や、ユビキチン–プロテアソーム分解を含むタンパク質品質管理経路にも関与します。HSPA8/HSC70に連関するプロテオスタシスや輸送の破綻は、神経変性、がん細胞のストレス耐性、感染症の病態生物学などとの関連が示唆されており、細胞恒常性ネットワークにおける重要な研究対象として広く解析されています。

HSPA8/HSC70 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における HSPA8 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、HSPA8内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、HSPA8の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、HSPA8が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。