Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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HSPA8/HSC70 Double Nickase Plasmid (h): sc-418508-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das HSPA8/HSC70 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- HSPA8/HSC70 Double-Nickase-Plasmid (h) und HSPA8/HSC70 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf HSPA8 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: HSPA8/HSC70: sc-7298
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
HSPA8/HSC70 Double Nickase Plasmid (h) | sc-418508-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HSPA8/HSC70 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-418508-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HSPA8 kodiert das konstitutiv exprimierte Chaperon HSC70, einen zentralen Bestandteil der HSP70-Familie, der an neu synthetisierte oder durch Stress denaturierte Polypeptide bindet und so deren Faltung, Wiederfaltung und die Verhinderung von Aggregation fördert. HSC70 nimmt an ATP-abhängigen Chaperon-Zyklen mit Ko-Chaperonen wie DNAJs und Nukleotidaustauschfaktoren teil und unterstützt die Proteostase in Zytosol und Organellen. Es ist außerdem ein zentraler Regulator der chaperon-vermittelten Autophagie, des Clathrin-Uncoating während der Endozytose sowie von Proteinqualitätskontrollwegen einschließlich des Ubiquitin-Proteasom-Abbaus. Eine Fehlregulation der mit HSPA8/HSC70 verknüpften Proteostase und des Traffickings wurde mit Neurodegeneration, Stresstoleranz von Krebszellen und der Biologie infektiöser Erkrankungen in Verbindung gebracht, was es zu einem viel untersuchten Knotenpunkt in Netzwerken der zellulären Homöostase macht.
HSPA8/HSC70 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des HSPA8-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von HSPA8 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die HSPA8-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit HSPA8-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.