Plasmide CRISPR/Cas9 KO HSPA8/HSC70 (h): sc-418508

Présentation

HSPA8 (HSC70) est une chaperonne moléculaire de la famille HSP70 exprimée de façon constitutive, qui soutient la protéostasie en favorisant, de manière ATP‑dépendante, le repliement, le repliement correctif et l’orientation (triage) des protéines naissantes ou endommagées par le stress. Elle participe à des voies de contrôle qualité des protéines, notamment l’autophagie médiée par les chaperonnes via la LAMP2A lysosomale, l’endocytose et le désassemblage de la clathrine, ainsi que la régulation de la dynamique des granules de stress, influençant ainsi les réponses cellulaires au stress protéotoxique et métabolique. Par ses interactions avec des co‑chaperonnes et le système ubiquitine‑protéasome, HSPA8 contribue à réguler le renouvellement des protéines, l’homéostasie des organites et la robustesse des voies de signalisation dans divers types cellulaires. La dérégulation des réseaux de chaperonnes liés à HSPA8 a été associée à la biologie de l’agrégation protéique et à des programmes d’adaptation au stress altérés, tels qu’observés dans des contextes de recherche sur les maladies neurodégénératives et le cancer.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO HSPA8/HSC70 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène HSPA8 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du HSPA8, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert HSPA8 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine HSPA8/HSC70.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en HSPA8 pour l'étude de la signalisation de HSPA8/HSC70, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de HSPA8 essentiels à la fonction de HSPA8/HSC70
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de HSPA8 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le HSPA8/HSC70 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le HSPA8/HSC70 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus HSPA8. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le HSPA8/HSC70 plasmide HDR (h) et le HSPA8/HSC70 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie HSPA8 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles HSPA8 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.