Plasmide Double Nickase (h) HSP 90α: sc-400088-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) HSP 90α correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide HSP 90α Double Nickase (h) et le plasmide HSP 90α Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant HSP90AA1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: HSP 90α Antibody (F-2): sc-515081
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) HSP 90α | sc-400088-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) HSP 90α | sc-400088-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HSP90AA1 code pour la chaperonne moléculaire HSP90α, un régulateur de la protéostasie très abondant et dépendant de l’ATP, qui soutient le repliement, la maturation et la stabilisation d’un large éventail de protéines clientes, notamment des kinases, des récepteurs nucléaires et des facteurs de transcription. HSP90α agit de concert avec des co‑chaperonnes dans la réponse au choc thermique et s’intègre à des voies qui gouvernent la progression du cycle cellulaire, la transduction du signal, l’adaptation au stress et le contrôle de la qualité des protéines. En amortissant l’instabilité du protéome, HSP90α influence la dynamique des complexes multiprotéiques et le renouvellement des nœuds de signalisation. Un dérèglement de l’activité de HSP90AA1/HSP90α a été associé à une tolérance au stress altérée ainsi qu’au remodelage de réseaux de signalisation oncogéniques et inflammatoires, ce qui en fait une cible fréquente des études sur la protéostasie et la dépendance aux voies de signalisation.
HSP 90α Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus HSP90AA1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de HSP90AA1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de HSP90AA1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de HSP90AA1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.