Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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HSP 90α Double Nickase Plasmid (h): sc-400088-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das HSP 90α Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- HSP 90α Double-Nickase-Plasmid (h) und HSP 90α Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf HSP90AA1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: HSP 90α: sc-515081
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
HSP 90α Double Nickase Plasmid (h) | sc-400088-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HSP 90α Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400088-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HSP90AA1 kodiert das molekulare Chaperon HSP90α, einen sehr häufig vorkommenden, ATP-abhängigen Regulator der Proteostase, der das Falten, die Reifung und die Stabilisierung vielfältiger Client-Proteine unterstützt, darunter Kinasen, nukleäre Rezeptoren und Transkriptionsfaktoren. HSP90α wirkt zusammen mit Co-Chaperonen in der Hitzeschockantwort und ist in Signalwege eingebunden, die Zellzyklusprogression, Signaltransduktion, Stressanpassung und Proteinkontrolle steuern. Durch das Abpuffern von Proteominstabilität beeinflusst HSP90α die Dynamik von Multiproteinkomplexen und den Umsatz zentraler Signalknoten. Eine Fehlregulation der Aktivität von HSP90AA1/HSP90α wurde mit veränderter Stresstoleranz sowie der Umgestaltung onkogener und entzündlicher Signalnetzwerke in Verbindung gebracht, weshalb es häufig im Fokus von Studien zu Proteostase und Signalwegabhängigkeiten steht.
HSP 90α Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des HSP90AA1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von HSP90AA1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die HSP90AA1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit HSP90AA1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.