Plásmido Doble Nickase (h) HSP 75: sc-402640-NIC

TRAP1 (HSP 75) es una chaperona mitocondrial de la familia HSP90 que respalda el control de calidad proteica, el plegamiento y la estabilización de proteínas cliente dentro de la matriz mitocondrial. Modula la respiración mitocondrial y la homeostasis bioenergética, se relaciona con la gestión de especies reactivas de oxígeno y puede influir en la transición de permeabilidad y en la señalización adaptativa al estrés. A través de estas actividades, TRAP1 afecta vías que conectan la dinámica mitocondrial con programas de supervivencia celular, incluidas las redes de proteostasis y la reprogramación metabólica. La expresión o actividad desregulada de TRAP1 se ha asociado con una función mitocondrial alterada en la biología del cáncer, en contextos de enfermedades neurodegenerativas y en otros trastornos caracterizados por estrés oxidativo y desequilibrio metabólico.

HSP 75 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus TRAP1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de TRAP1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de TRAP1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con TRAP1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.