Plásmido Doble Nickase (h) HSL: sc-401341-NIC

El gen humano **LIPE** codifica la lipasa sensible a hormonas (**HSL**), una hidrolasa de serina que cataliza pasos clave en la movilización de lípidos neutros al hidrolizar diacilglicéridos y otros ésteres lipídicos en adipocitos y tejidos esteroidogénicos. La actividad de HSL se controla de forma dinámica mediante fosforilación asociada a **PKA** y **AMPK**, e integra la señalización adrenérgica y de la insulina para regular la lipólisis, la remodelación de las gotas lipídicas y el equilibrio energético celular. A través de su papel en el flujo de ácidos grasos y en intermediarios de señalización lipídica, **LIPE** influye en el cableado de las vías metabólicas, incluido el metabolismo de glicerolípidos y el uso posterior de sustratos mitocondriales. Las alteraciones en la función de HSL y en la regulación de **LIPE** se estudian en el contexto de la desregulación metabólica, la inflamación del tejido adiposo y fenotipos asociados a la resistencia a la insulina.

HSL El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus LIPE en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de LIPE. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de LIPE. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con LIPE alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.