HPA1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402215-ACT

ヒトHPSEはヘパラナーゼ（HPA1）をコードしており、プロテオグリカン上のヘパラン硫酸鎖を切断するエンド-β-D-グルクロニダーゼである。これにより細胞外マトリックスおよび基底膜がリモデリングされる。HPA1は、ヘパラン硫酸に結合した増殖因子やサイトカインを遊離させることで、細胞―マトリックス相互作用、ケモカイングラジエント、血管新生シグナル、炎症細胞のトラフィッキングを調節し、接着・遊走・組織透過性を制御する経路と交差する。HPSE活性は、腫瘍微小環境ダイナミクスの変化、浸潤・転移の生物学、ならびに複数の疾患コンテキストにおける炎症制御の破綻と関連している。その結果、HPSEは細胞外マトリックスのターンオーバー、免疫細胞リクルート、プロテオグリカン介在性シグナル伝達を研究するための機序的ハブとして広く用いられている。

HPA1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性HPSEの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

HPA1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における HPSE 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はHPSE転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性HPA1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のHPSE遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるHPA1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびHPSE発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるHPA1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。