Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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HP1γ Double Nickase Plasmid (h): sc-417205-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das HP1γ Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- HP1γ Double-Nickase-Plasmid (h) und HP1γ Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CBX3 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: HP1γ: sc-398562
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
HP1γ Double Nickase Plasmid (h) | sc-417205-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HP1γ Double Nickase Plasmid (h2) | sc-417205-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CBX3 kodiert das Heterochromatin-Protein 1 Gamma (HP1γ), einen Chromatin-Reader, der über seine Chromodomäne an methyliertes Histon H3-Lysin 9 (H3K9me) bindet und zur Organisation von Heterochromatin beiträgt. HP1γ ist an der epigenetischen Regulation der Transkription, der Aufrechterhaltung der Genomstabilität sowie der Koordination von DNA-Replikation und -Reparatur durch dynamische Chromatinkondensation beteiligt. Durch die Beeinflussung der Stilllegung repetitiver Elemente und die Regulation von Genexpressionsprogrammen wird CBX3 in Signalwegen untersucht, die mit Zellzykluskontrolle, Differenzierung und Stressantworten verknüpft sind. Fehlregulierte, HP1γ-assoziierte Chromatinzustände wurden in mehreren onkologischen und neuroentwicklungsbezogenen Forschungskontexten beschrieben, was seine Nutzung als Ziel für mechanistische Studien zu epigenomgetriebenen Phänotypen unterstützt.
HP1γ Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CBX3-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CBX3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CBX3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CBX3-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.