HP1γ CRISPR Activation Plasmid (h): sc-417205-ACT

CBX3 kodiert das Heterochromatin-Protein 1 Gamma (HP1γ), einen chromatinassoziierten Faktor, der an die Methylierung von Histon H3 an Lysin 9 bindet und zur Organisation höhergeordneter Chromatinstrukturen beiträgt. HP1γ ist über Interaktionen mit epigenetischen „Writer“-/„Reader“-Proteinen und der RNA-Prozessierungsmaschinerie an der Heterochromatinbildung, der transkriptionellen Regulation, der DNA-Replikation und der DNA-Schadensantwort beteiligt. Durch die Beeinflussung der Chromatinzugänglichkeit und der Genomstabilität wirkt CBX3 auf die Zellzyklusprogression, Differenzierungsprogramme und stressresponsive Genexpressionsnetzwerke. Eine fehlregulierte HP1γ-Aktivität und veränderte CBX3-Expressionsmuster wurden mit aberranten epigenetischen Zuständen in verschiedenen Krebs- und neuroentwicklungsbezogenen Krankheitskontexten in Verbindung gebracht, was seine Nutzung als mechanistischer Knotenpunkt in Studien zur Chromatin- und Genomerhaltung unterstützt.

HP1γ Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CBX3-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

HP1γ Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CBX3-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CBX3-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen HP1γ-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CBX3-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von HP1γ-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des HP1γ-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CBX3-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.