Plasmide CRISPR/Cas9 KO HoxD12 (h): sc-407472

Présentation

HOXD12 code le facteur de transcription à homéoboîte HoxD12, membre du cluster HOXD, qui contribue à établir l’identité positionnelle au cours du développement embryonnaire et coordonne la mise en place des motifs du membre et du squelette axial. En tant que régulateur se liant à l’ADN, HoxD12 s’intègre à des réseaux régulateurs HOX plus larges ainsi qu’au contrôle au niveau de la chromatine afin de façonner des programmes transcriptionnels spécifiques des tissus gouvernant la différenciation et la morphogenèse. Une expression dérégulée de HOXD12 ou des perturbations de la régulation du cluster HOX ont été associées à des anomalies du développement et ont été rapportées dans des signatures transcriptionnelles de multiples cancers, reflétant son rôle dans le contrôle de réseaux de gènes liés à la lignée cellulaire et à la croissance. Dans des contextes adultes et pathologiques, une activité altérée de HOXD12 peut influencer les transitions d’état cellulaire, les programmes de migration et la réactivation de voies de développement.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO HoxD12 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène HOXD12 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du HOXD12, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert HOXD12 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine HoxD12.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en HOXD12 pour l'étude de la signalisation de HoxD12, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de HOXD12 essentiels à la fonction de HoxD12
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de HOXD12 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le HoxD12 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le HoxD12 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus HOXD12. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le HoxD12 plasmide HDR (h) et le HoxD12 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie HOXD12 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles HOXD12 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.