HoxC10 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-431637-ACT

Hoxc10 kodiert den Homeobox-Transkriptionsfaktor HoxC10, ein posteriores HOX-Protein, das die embryonale Musterbildung und die Positionsidentität durch die Regulation entwicklungsbezogener Genexpressionsprogramme steuert. In der Maus trägt die HoxC10-Aktivität zur axiale(n) und Extremitätenmorphogenese bei und beeinflusst die mesenchymale Differenzierung über transkriptionelle Netzwerke, die sich mit der WNT-, BMP- und Retinsäure-Signalgebung überschneiden. Eine dysregulierte HOX-Genexpression ist in krankheitsrelevanten Kontexten häufig mit veränderter Linienspezifizierung, aberranter Proliferation und invasiven Phänotypen assoziiert, wodurch Hoxc10 ein nützlicher Knotenpunkt für die Untersuchung von Entwicklungsfehlmusterungen und onkogener transkriptioneller Reprogrammierung ist. HoxC10 bietet zudem ein gut handhabbares Modell zur Untersuchung der epigenetischen Kontrolle von HOX-Clustern und von Chromatinzustands-Übergängen während der Differenzierung.

HoxC10 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Hoxc10-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

HoxC10 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Hoxc10-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Hoxc10-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen HoxC10-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Hoxc10-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von HoxC10-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des HoxC10-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Hoxc10-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.