Plásmido CRISPR de Activación (m) HoxC10: sc-431637-ACT

Hoxc10 codifica el factor de transcripción con homeobox HoxC10, una proteína HOX posterior que controla el patrón embrionario y la identidad posicional mediante la regulación de programas de expresión génica del desarrollo. En el ratón, la actividad de HoxC10 contribuye a la morfogénesis axial y de las extremidades e influye en la diferenciación mesenquimal a través de redes transcripcionales que convergen con las vías de señalización WNT, BMP y del ácido retinoico. La expresión desregulada de genes HOX se asocia con frecuencia a una especificación de linaje alterada, proliferación aberrante y fenotipos invasivos en contextos relevantes para la enfermedad, lo que convierte a Hoxc10 en un nodo útil para estudiar el patrón de desarrollo defectuoso y la reprogramación transcripcional oncogénica. HoxC10 también ofrece un modelo manejable para investigar el control epigenético de los clústeres HOX y las transiciones del estado de la cromatina durante la diferenciación.

HoxC10 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Hoxc10 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

HoxC10 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Hoxc10 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Hoxc10, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de HoxC10. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Hoxc10 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de HoxC10 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía HoxC10 en células tumorales con expresión de Hoxc10 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.