HoxA2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403732-ACT

HOXA2 kodiert den menschlichen Homeobox-Transkriptionsfaktor HoxA2, einen sequenzspezifischen DNA-bindenden Regulator, der während der Embryogenese die anteroposteriore Identität festlegt und die Linienfestlegung in neuralleistenderivierten sowie hindhirnassoziierten Geweben koordiniert. HoxA2 beeinflusst entwicklungsbezogene Transkriptionsprogramme, indem es den Chromatinzustand moduliert und mit retinsäure-responsiven sowie HOX-Cluster-Regulationsnetzwerken integriert, die Zellschicksalsentscheidungen und die Gewebemorphogenese steuern. Eine fehlregulierte HOXA2-Expression wurde mit angeborenen kraniofazialen und neuroentwicklungsbedingten Auffälligkeiten in Verbindung gebracht; zudem wird eine veränderte Aktivität von HOX-Programmen auch im Kontext onkogener transkriptioneller Umprogrammierung untersucht. Als Entwicklungsregulator mit kontextabhängigen Effekten stellt HOXA2 einen nützlichen Knotenpunkt dar, um Differenzierungstrajektorien und die Architektur transkriptioneller Schaltkreise zu analysieren.

HoxA2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen HOXA2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

HoxA2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des HOXA2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der HOXA2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen HoxA2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native HOXA2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von HoxA2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des HoxA2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem HOXA2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.