Plasmide Double Nickase (h) Hox11: sc-404662-NIC

TLX1 (Hox11) est un facteur de transcription à homéoboîte qui orchestre la mise en place des patrons embryonnaires et l’organogenèse, avec des rôles majeurs dans les programmes de développement hématopoïétiques et neuronaux. En se liant à des motifs d’ADN spécifiques de séquence, Hox11 régule des réseaux de gènes contrôlant l’engagement de lignée, la prolifération et la différenciation, en interaction avec des voies de régulation transcriptionnelles et épigénétiques qui déterminent le destin cellulaire. Une expression dérégulée de TLX1 est fortement associée à la leucémie aiguë lymphoblastique T (T-ALL), où des programmes transcriptionnels aberrants contribuent à une différenciation altérée et à la survie cellulaire. En tant que régulateur du développement, TLX1 est également utilisé comme marqueur et comme nœud mécanistique pour étudier l’activité de facteurs de transcription oncogéniques et le remaniement des réseaux géniques du développement dans les cellules humaines.

Hox11 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus TLX1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de TLX1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de TLX1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de TLX1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.