Each CRISPR/Cas9 Knockout (KO) Plasmid product consists of a pool of 3 plasmids designed to ensure identification and cleavage of a specific gene for maximum knockout efficiency. Each plasmid encodes a unique 20 nt sequence derived from the GeCKO (v2) library.
Each CRISPR/Cas9 Knockout (KO) Plasmid product consists of a pool of 3 plasmids designed to ensure identification and cleavage of a specific gene for maximum knockout efficiency. Each plasmid encodes a unique 20 nt sequence derived from the GeCKO (v2) library.
All products are provided as transfection-ready, purified plasmid DNA, except the Lentiviral Activation Particles which have been prepackaged as Lentiviral Particles for use with hard-to-transfect cells
CRISPR/Cas9 KO plasmids, Double Nickase Plasmids and CRISPR/dCas9 Activation plasmids are considered a "Licensed Product" and are to be used in accordance with the Limited/Label License. Click here for details
Description
20 µg of transfection-ready, purified plasmid DNA; Suitable for up to 20 transfections
hnRNP U HDR Plasmid (m) 는 hnRNP U CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m)와의 co-transfection을 권장합니다.
hnRNP U HDR Plasmid (m) 는 2-3 plasmids를 포함하며, 매개의 plasmid는 homology-directed DNA repair (HDR) template 는 hnRNP U CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m)로 인한 cut site와 대응됩니다.
매 HDR template은 두개의 800 bp homology arms이 디자인되여있어 Cas9-induced double strand DNA break site주변의 genomic DNA 와 결합합니다
매 HDR Plasmid 에는 puromycin resistance gene이 있어 stable knockout (KO) cells을 얻을수있으며 RFP (Red Fluorescent Protein) gene이 있어 형질주입효율을 관찰할수있습니다.
Puromycin resistance와 RFP genes는 두개의 LoxP sites 사이에 위치하여 Cre Vector sc-418923로 추가가공이 가능합니다.
20 µg of transfection-ready, purified plasmid DNA; Suitable for up to 20 transfections
hnRNP U Double Nickase Plasmid (m) 는 한쌍의D10A mutated Cas9 nuclease 와 타깃특정 20 nt guide RNA (gRNA)를 인코딩하는 plasmid를 포함하고있으며 gRNA는 대응 CRISPR/Cas9 KO보다 높은 특이성을 띤 knockout gene을 발현하도록 디자인되였습니다.
한쌍의 gRNA는 약 20bp가량 떨어져 있으며 이는 게놈DNA의 Cas9-mediated double nicking을 발생하여 DSB를 모방합니다.
한쌍의 plasmid 중 하나는 selection에 필요한 puromycin-resistance gene을, 다른하나는 형질주입효율을 확인하는 GFP marker를 보유하고있습니다.
hnRNP U Double Nickase Plasmid (m2)가 인코딩한 한쌍의 gRNAs는 hnRNP U Double Nickase Plasmid (m)가 인코딩한것과 다릅니다.
Transfection, gene knockout효율은 WB, IF나 IHC등 방법으로 측정할수있습니다, 권장하는 항체는 hnRNP U Antibody (3G6): sc-32315