hnRNP H3 Double Nickase Plasmid (h): sc-404805-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das hnRNP H3 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- hnRNP H3 Double-Nickase-Plasmid (h) und hnRNP H3 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf HNRNPH3 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: hnRNP H3: sc-376416
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
hnRNP H3 Double Nickase Plasmid (h) | sc-404805-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
hnRNP H3 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404805-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HNRNPH3 kodiert das humane heterogene nukleäre Ribonukleoprotein hnRNP H3, ein RNA-bindendes Protein, das G-reiche Motive erkennt und bei der Koordination von Entscheidungen zum pre-mRNA-Spleißen hilft. hnRNP H3 ist an der spliceosomenassoziierten Regulation der alternativen Exonverwendung beteiligt und koppelt die RNA-Prozessierung an Transkription und mRNA-Reifung. Über diese Funktionen trägt es zur Kontrolle des Gleichgewichts von Transkript-Isoformen bei, das Signalwege wie Zellzyklusregulation, Stressantworten und den RNA-Stoffwechsel mitprägt. Eine Fehlregulation der hnRNP-Familienaktivität und Störungen von Spleiß-Netzwerken werden häufig im Zusammenhang mit onkogener Transformation und Mechanismen neurodegenerativer Erkrankungen untersucht, was HNRNPH3 zu einem nützlichen Ziel macht, um spleißabhängige Phänotypen zu untersuchen.
hnRNP H3 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des HNRNPH3-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von HNRNPH3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die HNRNPH3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit HNRNPH3-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.