HNF-6 Lentiviral Activation Particles (h): sc-401082-LAC

ONECUT1 kodiert den hepatocyte nuclear factor 6 (HNF-6), einen sequenzspezifischen Transkriptionsfaktor, der genregulatorische Programme koordiniert, welche die epitheliale Differenzierung und die Organogenese steuern, insbesondere in Leber- und Pankreaslinien. HNF-6 integriert entwicklungsbezogene Transkriptionsnetzwerke, um die Aktivität von Promotoren und Enhancern zu kontrollieren, die an der hepatobiliären Spezifizierung, der Expression von Genen des Glukose- und Lipidstoffwechsels sowie der Aufrechterhaltung der epithelialen Identität beteiligt sind. Eine dysregulierte ONECUT1/HNF-6-Aktivität wurde mit einer veränderten endokrinen Pankreasentwicklung und hepatobiliärer Dysfunktion in Verbindung gebracht, was sie für die Untersuchung der transkriptionellen Kontrolle metabolischer Signalwege und der Festlegung von Zelllinien relevant macht. In humanen Zellmodellen ermöglicht die Modulation von HNF-6 die Untersuchung genregulatorischer Schaltkreise, chromatinabhängiger Transkription und krankheitsassoziierter transkriptioneller Zustände.

HNF-6 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente ONECUT1-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

HNF-6 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der ONECUT1-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen HNF-6-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen ONECUT1-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.