HMG-3/HMGB3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-420875

Übersicht

Hmgb3 kodiert das High-Mobility-Group-Box-Protein HMGB3 (HMG-3), einen nicht-histonischen, chromatinassoziierten Faktor, der DNA bindet und biegt, um die Nukleosomenarchitektur und die Zugänglichkeit des Genoms zu modulieren. HMGB3 ist an der Regulation von Transkriptionsprogrammen, der DNA-Replikation und -Reparatur sowie der Dynamik höhergeordneter Chromatinstrukturen beteiligt und beeinflusst damit den Zellzyklusverlauf und die linienspezifische Differenzierung. Über seine Funktionen in der Chromatinremodellierung und in DNA-schadensresponsiven Prozessen wurde eine veränderte HMGB3-Aktivität mit fehlregulierter Proliferation sowie aberranten hämatopoetischen und entwicklungsbezogenen Genexpressionsnetzwerken in Verbindung gebracht. In Mausmodellen wird Hmgb3 häufig untersucht, um die epigenetische Kontrolle von Stamm-/Vorläuferzuständen und die molekularen Konsequenzen von Chromatinstörungen zu analysieren.

Das HMG-3/HMGB3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Hmgb3-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Hmgb3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Hmgb3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die HMG-3/HMGB3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Hmgb3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der HMG-3/HMGB3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Hmgb3-Exone abzielen, die für die HMG-3/HMGB3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Hmgb3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom HMG-3/HMGB3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom HMG-3/HMGB3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Hmgb3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das HMG-3/HMGB3 HDR-Plasmid (m) und HMG-3/HMGB3 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Hmgb3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Hmgb3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.