Plasmide CRISPR d'Activation (h) HLA-DP β1: sc-401413-ACT

HLA-DPB1 code la chaîne β1 de HLA-DP, un composant central des hétérodimères du CMH de classe II qui présentent aux lymphocytes T CD4+ des peptides d’origine extracellulaire et façonnent la reconnaissance immunitaire adaptative. Son expression est principalement concentrée dans les cellules présentatrices d’antigènes professionnelles et est régulée par des programmes induits par les cytokines, notamment une transcription sensible à l’interféron-γ, ce qui soutient les voies de traitement et de présentation de l’antigène ainsi que l’amorçage des lymphocytes T. Les variations des allèles HLA-DPB1 influencent les répertoires de liaison aux peptides et la réactivité immunitaire, reliant ce locus à des différences de susceptibilité et d’évolution dans les affections auto-immunes et inflammatoires, les réponses aux maladies infectieuses et l’alloréactivité liée à la transplantation. En tant que partie de la région HLA de classe II, HLA-DP β1 constitue également un marqueur clé pour disséquer les mécanismes de présentation antigénique et les associations immunogénétiques en biologie immunitaire humaine.

HLA-DP β1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HLA-DPB1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

HLA-DP β1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HLA-DPB1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HLA-DPB1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de HLA-DP β1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HLA-DPB1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de HLA-DP β1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie HLA-DP β1 dans les cellules tumorales présentant une expression de HLA-DPB1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.