Plásmido CRISPR de Activación (h) HJURP: sc-405278-ACT

HJURP (proteína de reconocimiento de uniones de Holliday) es una chaperona centromérica de histonas esencial para la segregación correcta de los cromosomas. Media la deposición y el mantenimiento de la variante de histona H3 CENP-A en los centrómeros, coordinando el ensamblaje del cinetocoro y la progresión mitótica como parte de los procesos centrales del centrómero/cinetocoro y del mantenimiento de la cromatina acoplado a la replicación del ADN. Debido a su papel en la preservación de la identidad del centrómero y la estabilidad del genoma, las alteraciones en la expresión o función de HJURP se estudian con frecuencia en el contexto del estrés replicativo, la aneuploidía y los programas transcripcionales asociados a la proliferación. Estas características hacen de HJURP una diana útil para investigar la fidelidad mitótica, la dinámica de la cromatina y fenotipos del ciclo celular relevantes para el cáncer en modelos celulares humanos.

HJURP El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de HJURP sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

HJURP El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus HJURP en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional HJURP, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de HJURP. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo HJURP y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de HJURP en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía HJURP en células tumorales con expresión de HJURP silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.