Plasmide CRISPR/Cas9 KO HIV Tat-SF1 (h): sc-404479

Présentation

HTATSF1 code le facteur 1 spécifique de Tat du VIH (HIV Tat-SF1), une protéine nucléaire de liaison à l’ARN qui agit comme cofacteur transcriptionnel et régulateur du traitement du pré-ARNm. HIV Tat-SF1 a été associé à la coordination de la transcription par l’ARN polymérase II avec l’activité du spliceosome, influençant l’épissage alternatif et la maturation de l’ARNm dans divers programmes d’expression génique. Par ces rôles dans le traitement co‑transcriptionnel de l’ARN, HTATSF1 contribue à l’homéostasie cellulaire et a été étudié dans le contexte des interactions hôte–virus qui dépendent d’un contrôle précis de la transcription et du métabolisme de l’ARN. La dérégulation des facteurs d’épissage couplés à la transcription est largement pertinente pour comprendre les modifications des réseaux d’expression génique associées aux maladies et les phénotypes de traitement de l’ARN.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO HIV Tat-SF1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène HTATSF1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du HTATSF1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert HTATSF1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine HIV Tat-SF1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en HTATSF1 pour l'étude de la signalisation de HIV Tat-SF1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de HTATSF1 essentiels à la fonction de HIV Tat-SF1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de HTATSF1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le HIV Tat-SF1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le HIV Tat-SF1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus HTATSF1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le HIV Tat-SF1 plasmide HDR (h) et le HIV Tat-SF1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie HTATSF1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles HTATSF1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.