hippocalcin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-420938

Übersicht

Hpca kodiert Hippocalcin, ein neuronales EF-Hand-Calciumbindeprotein aus der Familie der neuronalen Calciumsensoren, das Ca2+-Transienten mit Veränderungen der synaptischen Signalübertragung und Erregbarkeit koppelt. Nach Ca2+-Bindung durchläuft Hippocalcin einen Konformationswechsel, der die Membranassoziation modulieren und Prozesse wie synaptische Plastizität, aktivitätsabhängiges Trafficking und Genexpressionsprogramme in Neuronen beeinflussen kann. Es ist an calciumabhängigen Signalnetzwerken beteiligt, die sich mit Signalwegen von Neurotransmitterrezeptoren sowie nachgeschalteten Kinase-/Phosphatase-Kaskaden überschneiden und so Langzeitpotenzierung und -depression prägen. Eine gestörte neuronale Ca2+-Homöostase und eine veränderte Funktion von Calciumsensoren sind relevant für mechanistische Untersuchungen kognitiver Phänotypen sowie von schaltkreisbezogenen Dysfunktionen in Mausmodellen neurodegenerativer oder neuropsychiatrischer Erkrankungen.

Das hippocalcin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Hpca-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Hpca-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Hpca nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die hippocalcin-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Hpca-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der hippocalcin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Hpca-Exone abzielen, die für die hippocalcin-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Hpca-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom hippocalcin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom hippocalcin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Hpca-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das hippocalcin HDR-Plasmid (m) und hippocalcin HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Hpca-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Hpca-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.