Plasmide Double Nickase (m) HIF1a: sc-420856-NIC

Le gène murin Hif1a code le facteur induit par l’hypoxie 1 alpha (HIF1a), un facteur de transcription sensible à l’oxygène qui coordonne l’adaptation cellulaire à une faible tension en oxygène. En hypoxie, HIF1a échappe à la dégradation médiée par les prolyl-hydroxylases et VHL, forme un hétérodimère avec ARNT (HIF1β) et se fixe sur des éléments de réponse à l’hypoxie afin de reprogrammer la transcription. Cet axe de signalisation régule le métabolisme glycolytique, les programmes angiogéniques et érythropoïétiques, l’homéostasie du fer et la survie cellulaire, en interaction avec les voies PI3K–AKT–mTOR, MAPK et les voies de stress mitochondrial. Une activité dérégulée de HIF1a est largement étudiée dans l’ischémie et les microenvironnements inflammatoires, ainsi que dans des modèles d’hypoxie tumorale où le remodelage métabolique et une signalisation immunitaire altérée sont des caractéristiques majeures.

HIF1a Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Hif1a dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Hif1a. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Hif1a. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Hif1a.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.