HEXB Lentiviral Activation Particles (h): sc-404765-LAC

ヒトのHEXBは、リソソームβ-ヘキソサミニダーゼのβサブユニットをコードしており、αサブユニットと複合体を形成してHex Aを、自身同士で複合体を形成してHex Bを構成します。これにより、GM2ガングリオシドおよび関連する糖鎖複合体が段階的に分解されます。このリソソーム加水分解酵素としての活性は、糖スフィンゴ脂質の異化、エンド・リソソーム系の恒常性維持、ならびにオートファジーや小胞輸送における膜由来基質のターンオーバーを支えます。HEXB機能の変化は、ガングリオシドのクリアランスやリソソームでの基質処理を攪乱するため、リソソーム蓄積障害の機序と、それに続く神経細胞・グリア細胞生物学への影響を検討するうえで重要な結節点となります。したがってHEXBは、脂質代謝、リソソームを中心としたストレス応答、基質蓄積と細胞機能障害を結び付ける経路を解析するモデルにおいて関連性の高い標的です。

HEXB レンチウイルス活性化粒子（h）は、完全な相乗的活性化メディエーター（SAM）転写活性化システムを、トランスダクション可能な高力価レンチウイルス粒子に封入することでこのニーズに対応し、より広範なヒト細胞タイプにおいて効率的なHEXBの発現上昇を可能にします。

HEXB レンチウイルス活性化粒子（h）は、レンチウイルス媒介を介して、シナジー活性化メディエーター（SAM）システムのすべての機能的構成要素を届ける。このシステムは、標的細胞へ共導入される3種類の粒子製剤で構成されています。1つは、VP64転写活性化ドメインとブラスティシジン耐性遺伝子を融合させた、触媒活性のないdCas9（D10AおよびN863A変異）をコードするものです。ヒグロマイシン耐性遺伝子を有するMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードするもの；および、2つのMS2 RNAアプタマーと融合した標的特異的20塩基対sgRNAをコードし、プロマイシン耐性遺伝子を有するもの。レンチウイルスによる導入および発現カセットのゲノムへの組み込み後、SAM構成要素は安定して発現し、HEXB転写開始点の上流にある近位プロモーター領域内の標的座に集合する。そこでは、VP64、p65、およびHSF1が協調して作用し、内因性の転写機構を動員して、内因性HEXBの発現を持続的に上向きに調節する。ヌクレアーゼ不活性型dCas9を使用することで、二本鎖DNA切断の導入を回避し、天然のHEXBゲノム座および制御機構を維持します。

レンチウイルス形式には、いくつかの実用的な利点があります。安定したゲノム組み込みにより、細胞分裂を経ても遺伝的に継承される活性化がサポートされます。高力価の粒子調製により、施設内でのウイルス生産の必要性がなくなります。また、初代培養細胞、非増殖性細胞、およびトランスフェクション抵抗性細胞との互換性により、実験の適用範囲が広がります。成功したトランスダクションは、プロマイシン、ハイグロマイシン、ブラスティシジンを用いた三重抗生物質選別により確認および選別が可能である。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。