Plasmide Double Nickase (h) HEXA: sc-405523-NIC

HEXA code la sous-unité α de la β‑hexosaminidase A, une glycosidase lysosomale qui s’associe à la sous-unité β (HEXB) pour catalyser la dégradation progressive du ganglioside GM2 et de glycoconjugués apparentés. Cette activité est au cœur du catabolisme médié par les lysosomes et de l’homéostasie lipidique, reliant la fonction de HEXA au trafic endolysosomal, au dialogue autophagie–lysosome et aux réponses au stress cellulaire déclenchées par l’accumulation de substrats. Les variants perte de fonction de HEXA sont associés à la gangliosidose GM2 (maladie de Tay–Sachs), un système modèle pour étudier comment le dysfonctionnement lysosomal perturbe la physiologie neuronale, la composition membranaire et la protéostasie. En tant que cible de recherche, HEXA soutient des études sur la biologie des lysosomes, le métabolisme des glycosphingolipides et les relations génotype–phénotype dans des modèles cellulaires humains.

HEXA Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus HEXA dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de HEXA. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de HEXA. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de HEXA.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.