Hex CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-420852

Übersicht

Hhex (Hex) ist ein Homeobox-Transkriptionsfaktor, der die frühe embryonale Musterbildung und Organogenese reguliert und bei der Spezifikation des anterioren Endoderms sowie der Entwicklung von Leber‑, Pankreas‑ und Schilddrüsenlinien in der Maus eine wichtige Rolle spielt. Durch DNA-Bindung über seine Homöodomäne integriert Hex entwicklungsbiologische Signaleingänge, um Genexpressionsprogramme zu steuern, die Zellschicksalsentscheidungen, Morphogenese und Gewebedifferenzierung beeinflussen. Die Hhex-Aktivität überschneidet sich mit Signalwegen, die die endodermale und vaskuläre Entwicklung kontrollieren, und wurde mit der Regulation hämatopoetischer und endothelialer Gennetzwerke in Verbindung gebracht. Eine fehlregulierte Hhex-Expression oder -Funktion ist mit Entwicklungsanomalien assoziiert und wurde zudem mit veränderten Differenzierungszuständen in Zusammenhang gebracht, die für die Krebsbiologie und Modelle hämatologischer Erkrankungen relevant sind.

Das Hex CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Hhex-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Hhex-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Hhex nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Hex-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Hhex-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Hex-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Hhex-Exone abzielen, die für die Hex-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Hhex-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Hex CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Hex CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Hhex-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Hex HDR-Plasmid (m) und Hex HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Hhex-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Hhex-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.