HES2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-407494

Panoramica

HES2 codifica un repressore trascrizionale basic helix-loop-helix (bHLH) della famiglia Hairy/Enhancer-of-split, che modula programmi di espressione genica responsabili delle decisioni sul destino cellulare. In qualità di effettore a valle della segnalazione Notch, HES2 contribuisce a reti di feedback trascrizionale che limitano la differenziazione e aiutano a coordinare la tempistica dello sviluppo, agendo spesso tramite repressione a livello di promotori e interazione con complessi corepressori. Influenzando l’impegno di linea e l’equilibrio tra proliferazione e differenziazione, un’attività alterata di HES2 è rilevante negli studi sui disturbi dello sviluppo e sulla disregolazione, associata al cancro, dei circuiti trascrizionali dipendenti da Notch. In vitro, la perturbazione di HES2 è comunemente utilizzata per analizzare il controllo trascrizionale del mantenimento dei progenitori, i programmi neurogenici e gli esiti di differenziazione specifici del contesto.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO HES2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene HES2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del HES2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto HES2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina HES2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di HES2 per lo studio della segnalazione di HES2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni HES2 critici per la funzione di HES2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di HES2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal HES2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal HES2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus HES2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal HES2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR HES2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia HES2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio HES2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.