Particules Lentivirales d'Activation (m) HES1: sc-420832-LAC

La protéine HES1 de la souris (Hes1) est un répresseur transcriptionnel à domaine hélice-boucle-hélice (bHLH) qui agit comme effecteur canonique de la signalisation Notch. HES1 module les décisions de destinée cellulaire en réprimant des programmes transcriptionnels proneuronaux et pro-différenciation, maintenant ainsi les états progéniteurs et régulant la prolifération, la temporalité de la différenciation et la structuration des tissus. Il participe à des réseaux d’expression génique oscillatoire et interagit avec des voies telles que Wnt et Hedgehog afin d’orienter l’engagement de lignée dans de nombreux tissus, notamment le système nerveux et les compartiments immunitaires. Une activité dérégulée de HES1 a été associée à des altérations de la dynamique des cellules souches/progénitrices et à des anomalies du développement, et elle est fréquemment étudiée dans des modèles de programmes transcriptionnels oncogéniques et de mécanismes de réponse aux traitements, sans que cela n’implique un bénéfice clinique.

Les particules d'activation lentivirales HES1 (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Hes1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales HES1 (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Hes1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de HES1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Hes1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.