Plasmide Double Nickase (h) HERG: sc-401143-NIC

KCNH2 code le canal potassique humain HERG (Kv11.1) dépendant du voltage, qui conduit le courant rectificateur retardé rapide (IKr), déterminant majeur de la repolarisation du potentiel d’action cardiaque et de la durée de l’intervalle QT. L’activité du canal HERG s’intègre aux voies de l’excitabilité et de l’homéostasie ionique en modulant la dynamique du potentiel de membrane et le calendrier de la période réfractaire. Des perturbations génétiques ou fonctionnelles de KCNH2 sont associées à des phénotypes de QT long héréditaires et acquis ainsi qu’à une susceptibilité accrue aux arythmies ventriculaires, et ce canal constitue une cible hors cible fréquemment problématique dans les études d’électrophysiologie et de pharmacologie de sécurité. Au-delà des cardiomyocytes, l’expression de KCNH2 dans des contextes cellulaires excitables et prolifératifs soutient des recherches sur le trafic du canal, la régulation de son gating et les interactions entre la membrane et la signalisation.

HERG Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus KCNH2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de KCNH2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de KCNH2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de KCNH2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.